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Technologie de l'ADN recombinant


Chaque fragment d'ADN, qui a été clivé et séparé du reste du matériel génétique, contient un ou plusieurs gènes.

N'oubliez pas que chaque gène donne naissance à une protéineAlors que nous étudions le gène, nous étudions la protéine qu'il code.

Mais que devons-nous faire pour étudier le gène?

Nous devons l'introduire dans le matériel génétique (ADN) d'un hôte pour que la transcription du gène de l'ARNm et la traduction des protéines se produisent.

Le hôte C'est un organisme qui se multiplie (se reproduit) rapidement, comme les bactéries. Lorsque les bactéries se reproduisent par bipartition, elles transmettent leur matériel génétique à leurs "enfants", donc si ce matériel contient le fragment d'ADN étudié, nous aurons bientôt des millions de bactéries avec le gène.

Le plasmide C'est le matériel génétique circulaire non lié au chromosome qui se propage par l'hyaloplasme des bactéries. Il subit le même processus que la transcription et la traduction de l'ADN chromosomique, et se multiplie avec chaque division cellulaire, en passant une copie à chaque cellule "fille".

Le plasmide est retiré des cellules bactériennes afin que le gène d'étude puisse être inséré puis replacé dans la bactérie.

Pour une meilleure compréhension, connaissons ce processus étape par étape (suivez l'image):

  1. Les chercheurs veulent étudier un gène humain qui produit une protéine qui n'est pas connue pour fonctionner.
  2. Les chercheurs «coupent» (à l'aide d'enzymes de restriction) de l'ADN humain, le gène d'intérêt.
  3. Ce fragment d'ADN contenant le gène est multiplié par PCR pour obtenir plusieurs copies du même fragment (ou des mêmes informations).
  4. La même enzyme qui a clivé le gène de l'ADN humain est utilisée pour cliver le plasmide bactérien. N'oubliez pas que le fragment d'ADN, lorsqu'il est clivé, génère des pointes adhésives qui sont complémentaires du plasmide s'il est clivé avec la même enzyme.
  5. Ensuite, le plasmide clivé est mélangé avec les fragments d'ADN (contenant le gène) et une enzyme appelée ligase "colle" les fragments au plasmide, produisant ce que l'on appelle le plasmide. ADN recombinant. Cela fait, l'ADN recombinant est introduit dans une bactérie hôte.
  6. Un bactéries hôtes Il est placé dans un milieu nutritif sélectif, seuls ceux à ADN recombinant se développent en colonies. Après plusieurs générations de bactéries, le produit de l'expression des gènes, les protéines humaines, est purifié des bactéries (elles sont séparées des protéines bactériennes).

Cette méthode produit une grande quantité de protéines humaines permettant ainsi son étude.